产品目录
最新上架产品
内毒素检测---LAL (Limulus amebocyte lysate)试剂
酵母裂解酶Zymolyase
R9ab细胞 -新西兰兔白肺
内毒素快速检测试剂盒Pyrosate

内毒素检测方法-浊度法

发布时间:2010-7-15 19:20:24

 

浊度法:当有内素素存在的情况下, LAL 在形成凝胶前会先产生混浊,当内毒素含量愈高时,混浊愈快形成,混浊度可以由反应后读取 OD 360 测知,并据此对样品中的内毒素进行定量

理论上,浊度法可以有两种定量方法:

(1) 终点法
  最简单的测试法,不同浓度的内毒素会产生不同的混浊度,因此我们可以依据不同浓度标准品相同反应时间所得到之浊度 OD 制作出标准曲线,而根据此标准曲线就可以计算出相对于样品 OD. 值的浓度了。
  不过大部份的人并不常用此法来测试,最常见的问题就是时间点不易掌控。详细原因可以看以下反应曲线图得知:
(1~4
代表不同内毒素浓度的反应曲线),内毒素浓度愈高,反应速度愈快(内毒素浓度 1>2>3>4);A, B, C代表截取不同反应时间,可对应各内毒素浓度的OD值。由图可知,反应时间过短(A),各低内毒素浓度样品(ex. 2,3,4)OD.值仍低且接近;反应时间过长(C),则高浓度者反应趋于饱合,OD.也会很接近。因此,无论是时间过长或过短,以浓度与OD作图都无法获得良好的线性关系。适当的反应时间对终点法十分重要,同时,这也是通常建议终点法的标准品系列稀释宜以 2 倍稀释,不建议采用过高稀释倍数的原因:不易取得适当的反应时间

 

(2) 动力学法
 此法与终点法的不同在于测量不同内毒素浓度的标准品到达一定 OD 时所需反应时间(Onset OD,再依据此数值来作出标准曲线来测量样品中内毒素浓度。由于此法是侦测时间,所以不受到反应时间的限制,因此所得到的结果较终点法更为精确。唯一要注意的是测量仪器及软件是否可以在每个时间点侦测记录每个样品的 OD 值进行分析,因此在选购仪器时需相当注意。

                                                

 

实际使用上,由于浊度反应快,一般皆以动力学法为之。